유전자 클로닝/ Gene cloning

유전자 클로닝/ Gene cloning

 

Gene clone: 같은 유전자를 가지는 집단

Gene cloning: 이러한 집단을 만드는 과정 자체를 일컫음

 

<Cloning의 목적 및 이용>

- DNA를 자르고, 붙이고, 변형시켜 재조합 DNA (recombinant DNA)를 만들어 실험에 사용할 유전자를 생산 가능.

-  이미 알려진 유전자 및 새로운 유전자의 특성을 연구.

    ① vector 내에 삽입된 유전자를 세포내에 주입하여 특정 단백질의 과발현 (overexpression)을 유도.

    ② 특정 세포내에 유전자 단백질의 위치를 확인

 

<재조합 DNA (Recombinant DNA)>

재조합 DNA (Recombinant DNA) (출처: http://bio1510.biology.gatech.edu/module-5-integrative-health/01-recombinant-dna/)

인위적으로 재조합 된 DNA를 말함.

1. plasmid에 제한효소 (endonuclease)를 이용하여 4-6 bp 정도의 pallindromic 한 DNA 서열을 절단한다.

제한효소의 종류로는 EcoRI, XhoI 등이 있다. 이 제한효소는 pallindromic한 서열을 지닌다.

2. DNA ligase로 plasmid와 DNA 절편을 붙인다.

3. 재조합 DNA가 만들어진다.

 

<Cloning 과정>

Cloning과정 (출처: https://www.pathwayz.org/Tree/Plain/GENE+CLONING)

  1. 유전자를 설정하고 그 유전자를 제한효소 (restriction enzymes)로 잘라 얻어낸다

  2. bacterial plasimid를 같은 제한효소로 잘라 open시킨다.

  3. DNA ligase를 이용하여 얻은 유전자를 backbone이 되는 bacterial plasmid에 삽입한다.

  4. 유전자가 삽입된 plasmid (Recombinant DNA)를 bacteria 세포 내로 주입한다. (transformation 과정)

  5. Bacteria 중에서 올바르게 만들어진 clone을 확인하고 선택한다.